Антисмысловые олигонуклеотиды (АСО) и малые интерферирующие РНК (миРНК) эффективно ингибируют гены, блокируя активность различных РНК в клетке, что позволяет изучать функции генов in vitro и in vivo.
● миРНК - короткие двуцепочечные РНК (17-27 пар оснований) с 3′- выступающими концами, действующие через механизм РНК-интерференции и расщепляющие РНК-мишень с помощью комплекса RISC и эндонуклеазы Ago2.
● АСО - короткие последовательности (15-25 нуклеотидов), связывающиеся с РНК-мишенью и расщепляющие ее с помощью РНКазы H1.
AO «ГенТерра» предоставляет услуги по дизайну и синтезу синтетических АСО/миРНК, анализу активности АСО/миРНК in vitro (эффективность ингибирования и определение IC50), а также проведению начальных in vivo экспериментов на животных. Также мы занимаемся подбором АСО/миРНК для их использования в качестве отрицательных и положительных контролей.
Мы рекомендуем использовать химически модифицированные миРНК/АСО, чтобы повысить их стабильность к внутриклеточным нуклеазам. Кроме того, добавление модифицированных оснований в последовательность АСО способствует повышению его термодинамической стабильности и сродства к РНК-мишени.
Химические модификации, доступные для включения в последовательность миРНК/АСО, представлены в таблице ниже:
|
Химическая модификация |
Метод |
|
2'-O-метоксиэтил (2'-MOE) |
АСО |
|
Locked Nucleic Acid (LNA) |
АСО |
|
2'-O-метил (2'OMe) |
миРНК/АСО |
|
Защитная 3'-концевая группа dTsdT |
миРНК |
Процесс разработки терапевтических олигонуклеотидов представлен на данной схеме
